前言:
碘醚柳胺是鹵化水楊酰苯胺類(lèi)殺吸蟲(chóng)藥,可以抑制蟲(chóng)體線(xiàn)粒體的磷酸化過(guò)程,從而阻止蟲(chóng)體內三磷酸腺甙Chemicalbook(ATP)的合成,導致蟲(chóng)體能量代謝的活力迅速減弱而死亡。它與血液蛋白有很強的親和力,所以藥效在血液中有較長(cháng)的持續時(shí)間,造成藥物在動(dòng)物體內富集,而人類(lèi)食用這些肉類(lèi)會(huì )使獸藥殘留進(jìn)入人體,從而影響身體健康。
本文參照《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見(jiàn)稿)》,利用EZsepTMMAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)進(jìn)行凈化,再用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測,建立了一種對動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的分析方法。
關(guān)鍵詞:
動(dòng)物性食品,碘醚柳胺,固相萃取
1, 實(shí)驗過(guò)程
MPREP-SPE08手動(dòng)固相萃取裝置,貨號:PZ0008,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
E.T.氮吹濃縮儀,貨號:C020017,北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
4500質(zhì)譜系統,SCIEX公司;
EZsepTMMAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802),北京萊伯帕茲檢測科技有限公司;
冷凍離心機,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學(xué)儀器廠(chǎng) ;
甲醇(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
乙腈(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司;
甲酸,氨水,三乙胺等化學(xué)品均為分析純或以上,購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
碘醚柳胺標準物質(zhì):100mg/瓶,購自壇墨質(zhì)檢標準物質(zhì)中心 。
碘醚柳胺標準儲備液:取碘醚柳胺標準品適量(相當于有效成分約10mg),精密稱(chēng)定,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為1000μg/mL的碘醚柳胺標準儲備液。
碘醚柳胺標準中間液:移取碘醚柳胺標準儲備液0.1mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為10μg/mL的碘醚柳胺標準中間液。
碘醚柳胺標準使用液:碘醚柳胺標準中間液0.1mL,用乙腈稀釋至10mL容量瓶中,配制成濃度為0.1μg/mL的碘醚柳胺標準使用液。
分別移取0.1μg/mL的碘醚柳胺標準使用液0.02、0.1、0.5、2.0、5.0mL分別置于10mL容量瓶中用甲醇定容至刻度,標準濃度為0.2 μg/L、1μg/L、5μg/L、20μg/L、50μg/L。
1.3 實(shí)驗部分
取羊腰試樣2g,置于50 mL聚丙烯離心管中,加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液均質(zhì)5min,超聲提取10 min,8000 r/min離心5 min,收集上清液至另一50 mL離心管中殘渣中加10.0 mL 1%三乙胺乙腈溶液,重復提取一次,合并兩次上清液,混勻,取提取液5.0 mL備用待凈化。
EZsepTMMAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)用5mL乙腈進(jìn)行活化,取1.3.1待凈化液上樣,上樣結束后用5mL乙腈淋洗萃取柱,再用5mL 5%甲酸乙腈洗脫萃取柱,收集洗脫液,以E.T.氮吹濃縮儀,45℃氮氣濃縮至近干,加2.0 mL甲醇,渦旋混勻過(guò)微孔濾膜后供LC-MS/MS測定。
色譜柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,2.1*100mm);
檢測方式:多反應監測(MRM);
流動(dòng)相:A:0.1%氨水水溶液 B: 甲醇;
流速:0.3mL/min;
進(jìn)樣量:5μL。
表1流動(dòng)相梯度洗脫表
時(shí)間min | 流動(dòng)相A% | 流動(dòng)相B% |
0 | 70 | 30 |
5 | 0 | 100 |
8 | 0 | 100 |
8.1 | 70 | 30 |
10 | 70 | 30 |
1, 實(shí)驗結果
圖1 標液色譜圖
圖2碘醚柳胺標準曲線(xiàn)圖
1, 結論
本次實(shí)驗展示了使用EZsepTMMAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)對動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量進(jìn)行凈化,通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測定,其加標回收率在85.0%~93.3%之間,RSD在3.6%,能夠滿(mǎn)足標準要求。說(shuō)明EZsepTMMAX固相萃取柱(60 mg/3mL,貨號:PZ12802)能很好的完成方法中的凈化工作,并且結果穩定、可靠。
2, 參考文獻
1. 《動(dòng)物性食品中碘醚柳胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(征求意見(jiàn)稿)》
表 1 加標回收率結果